fa باززایی شاخه القا شده با تدیازورون و تراریختی ژنی با آگروباکتریوم1 در گیاه کلزا (برسیکانلپوس ال.)2 تولید گیاهان تراریخت کلزا با استفاده از میانجی آگروباکتریوم نیاز به بهینه‌سازی روش‌های کشت بافت و تراریختی دارد. برای این منظور آزمایشی به صورت فاکتوریل در قالب طرح بلوک‌های کامل تصادفی در سه تکراراجرا شد. غلظت‌های مختلف بنزیل آدنین(BA)(5/1, 3 و 5/4 میلی‌گرم بر لیتر) و تدیازورون (TDZ) (0 , 15/0 و 3/0 میلی‌گرم بر لیتر) با سنین مختلف جداکشت‌های محور زیر لپه(7، 14 و 21 روزه) مورد بررسی قرار گرفتند. تفاوت معنی‌داری در اثر مثقابل هورمون‌های BA و TDZ دیده شد, به نحوی که بیشترین درصد شاخه‌زایی (% 174) از کاربرد 5/4 میلی‌گرم بر لیتر BA و 3/0 میلی‌گرم بر لیتر TDZ حاصل شد. سن جدا کشت نیز تأثیر معنی‌داری بر در صد شاخه‌زایی داشت. جداکشت‌های 21روزه توانایی تولید بیشترین درصد شاخه‌زایی را داشتند. شاخه‌های تولید شده پس از انتقال به محیط ریشه‌زایی دارای 2 میلی‌گرم بر لیتر ایندول بوتیریک اسید تولید ریشه کردند. با دست‌یابی به بهترین تیمار هورمونی و سن جدا کشت اقدام به انجام تراریختی توسط میانجی آگروباکتریوم شد. آگروباکتریوم سویه LBA حاوی پلاسمید pBI مورد استفاده قرار گرفت. گیاهان تراریخت نشده در محیط انتخاب, حاوی کانامایسین با از دست دادن ساختار کلروفیلی به رنگ سفید یا ارغوانی درآمدند و حذف گردیدند، در حالی‌که گیاهان تراریخت شده با دریافت ژن NPTII و ایجاد مقاومت در مقابل کانامایسین و حفظ کلروفیل در محیط انتخاب، به رنگ سبز باقی ماندند و ریشه کردند. گیاهان ریشه‌دار به خاک منتقل شدند و تولید گل و دانه کردند. از گیاهان سبز مقاوم به کانامایسین آزمون GUS انجام شد. ظهور رنگ آبی در حضور سوبسترای X-Gluc نشانگر بیان ژن GUS در گیاهان تراریخت بود. از برگ‌های سبز گیاهان مقاوم به کانامایسینDNA ژنومی استخراج شد و پس ازPCR ظهور باند pb 520 بیانگر حضور ژن GUS دراین گیاهان بود. بنا براین با استفاده از این روش می‌توان اقدام به انتقال ژن‌های مقاومت به تنش‌های زیستی و غیرزیستی کرد. An in vitro method was developed for high frequency shoot regeneration and Agrob-acterium-mediated transformation of Brassica napus hypocotyl explants. The different concentrations of benzyladenine (BA), 1.5, 3.0 and 4.5 mg l-1, and thidiazuron (TDZ), 0, 0.15 and 0.30 mg l-1 were evaluated for shoot regeneration using hypocotyl explants 7, 14 and 21- day- old. Treatments were arranged in a randomized complete block design with three replications. Significant differences were found in the interactions of BA and TDZ concentrations along with the ages of the explants. Maximum shoots regeneration was obtained using 4.5 mg l-1 BA and 0.30 mg l-1 TDZ. Shoot regeneration was highly affected by the age of the explants. We found that 21-day-old explants were more likely to undergo shoot development than the others. Under these culture conditions, the highest percentage of shoot regeneration was 174.0% for hypocotyl explants. Regenera-ted shoots rooted when cultured on a root induction medium supplemented with 2 mg l-1 of indolebutyric acid(IBA).The rooted plantlets were successfully established in the soil and developed normal fertile flowers and viable seeds. In light of its efficiency, this hypocotyl regeneration method could be a suitable tool for genetic transformation. A. Fumefaciens strain LBA4404 carring disarmed binary vector pBI121 was used for plant transformation. After cocultivation for 48h, the hypocotyl explants were placed on shoot induction media containing 10 mgl-1 kanamycine. The green shoots were transferred to root induction medium. Rooted plantlets were transferred to green house. Six kanamycine resistance plants from 75 hypocotyl and grown for seed formation. GUS assay and PCR confirmed the introduction of the T-DNA into the transgenic rapeseed genome. The gene transfere system described in this method has a great potential for genetic improvement of Brassica napus by introducing genes responsible for agronomically important traits such as herbicide tolerance. به رنگ سبز باقی ماندند و ریشه , 167 180 http://jsci.khu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3-86&slc_lang=fa&sid=1